Metronidazole ELISA 시험 장비 안전한 음식 테스트
Metronidazole ELISA 시험 장비 안전한 음식 테스트
st 원리
이 시험 장비는 표본에 있는 Metronidazole의 탐지를 위한 경쟁적인 효소 면역화학적검정에 근거를 둡니다. 표본에 있는 Metronidazole 및 항원은 Metronidazole 반대로 항체에 대해 경쟁하기 위하여 마이크로 잘 지구에 전 입힙니다. 효소 어원이 같은 말의 추가가 채색을 위해, TMB 기질 추가된 후에. 표본의 광학 조밀도 (OD) 가치에는 그것에 있는 Metronidazole도의 부정 상호 관계가 있습니다. 이 가치는 표준 곡선과 비교되고 Metronidazole 농도는 연속적으로 얻어집니다.
명세
감도: 0.1ppb
탐지 한계
0.1ppb에 관하여 꿀
교차 반응 비율
Metronidazole100%
수산기 metronidazole47%
Hydroxymethyl dimetridazole53%
Tinidazole2%
Dimetridazole800%
Ornidazole5%
회복율
90±30%
성분
1) 마이크로 잘 지구: 8개의 이동할 수 있는 우물을 가진 12의 지구 각각
2) 6× 표준 솔루션 (제각기 1개 mL): 0개의 ppb, 0.1 ppb, 0.3ppb의 0.9 ppb, 2.7 ppb와 8.1 ppb
3) 효소 어원이 같은 말 (12 mL) 1개의 병
4) 항체 일 해결책 (6mL) 1개의 병
5) 기질 A 해결책 (6개 mL) 1개의 병
6) 기질 B 해결책 (6개 mL) 1개의 병
7)는 해결책 (6개 mL)를 1개의 병 멈춥니다
8) 20×는 세척 완충기 (30 mL)에 1개의 병 집중했습니다
9) 재 녹이는 해결책 (50 mL) 1개의 병
10) 조직 추출 처리 해결책 I (건조한 분말, 선택) 1개의 병
요구되고는 그러나 제공되지 않는 물자
1) 장비: microplate 독자 (450nm, 630nm)는, 인쇄 기계, 균질화기, 질소 건조 장치, 와동, 셰이커, 측정하는 분리기 (3000g 이상에), 균형 피펫으로 옮깁니다
(0.01 g) 의 부화기의 상호 감각력 (4°C-25°C) 목욕 타이머에서.
2) Micropipettors: 단 하나 수로 20-200 µL, 100-1000 µL 및 8 수로 30~300 µl;
3) 시약 (AR): HCl, NaOH의 에틸 아세테이트, n 제초제.
표본 전처리
지시
뒤에 오는 점은 표본의 아무 종류나의 전처리의 앞에를 취급되어야 합니다:
1.Only는 실험을 위해 처분할 수 있는 끝 사용될 수 있고 다른 시약 흡수를 위해 사용될 때 끝은 바뀌어야 합니다;
2. 실험의 앞에, 각 실험적인 장비는 청결해야 하고, 실험적인 결과와 방해하는 오염을 피하기 위하여 필요하다면 재 청소되어야 합니다.
표본 전처리의 앞에 해결책 준비:
꿀
1)는 50ml 플라스틱 분리기 관으로 2± 0.05 g 꿀 표본의 무게를 답니다;
2)는 녹이기 위하여 2ml 0.1M NaOH의 동요 1min를 위해 (또는 30s를 위한 사용 와동)를 강하게 추가합니다;
3)는 5min를 위해 4ml 에틸 아세테이트, 동요, (또는 1min를 위한 와동을), 완전하게 접촉하 표본과 에틸 아세테이트를 강하게 추가합니다;
4) 5min를 위한 실내 온도에 3000 g 이상에 분리기;
5)는 10ml 유리관으로 2ml 상청액을 선택합니다 (주: 아래로 층 물 단계가), 질소 건조 장치에 의하여 50-60℃ 목욕에서 말리기 위하여 붑니다 걸리지 마십시오;
6)는 해결책, 동요 강하게 Redissolving 0.5ml를 2min를 위해 추가합니다 (또는 1min를 위한 사용 와동)를;
7)는 50ul에게 시험을 위한 더 낮은 층 액체를 가지고 갑니다.
표본의 희석의 겹: 0.5
ELISA 절차
지시
1)는 실내 온도에 (20-25 ℃) 사용의 앞에 모든 시약 및 마이크로 잘 지구를 가져옵니다;
2)는 사용의 직후 2-8 ℃에 모든 시약을 돌려보냅니다;
3) ELISA 분석의 재현성은, 고도로, 판 씻기의 견실함에 달려 있습니다. 판 씻기의 정확한 가동은 ELISA에 있는 요점 절차입니다;
4) 항온에 외피를 위해, 모든 표본 및 시약은 가벼운 노출을 피해야 하고, 각 microplate는 덮개 막에 의해 밀봉되어야 합니다.
가동 절차
1. 각 시약이 사용의 앞에 균등하게 섞기 위하여 동요되어야 한다는 것을 적어도 30 분 동안 실내 온도에 (20-25 ℃) 시험 장비를, 주의합니다, 끼워넣습니다 판 구조로 필수 마이크로 잘 지구를 가져오십시오. 사용되지 않는 microplate, 얼지 않는 2-8 ℃에 상점을, 다시 봉했습니다.
2. 열거: 표본과 표준 솔루션에 따라 마이크로 우물을 열거하십시오; 각 표본 및 표준 솔루션은, 기록합니다 그들의 위치를 이중으로 실행되어야 합니다.
3. 분리되는 이중 우물로 표본 표준 솔루션의 50 µL를 추가하십시오; 그 때 판을 수동으로 동요해서 각으로 항체 일 해결책의 50 µL를, 혼합 온화하게 잘 추가하십시오. 덮개 막을 가진 microplate를 밀봉하고, 암흑에 있는 60min를 위한 4 ℃에 알을 품으십시오.
4. microwell에서 액체를, 흡수성 종이에 말리고기 위하여, 밖으로 가지고 가기 위하여 흡수성 종이, 반복으로 3-4배 말릴 것이다 15-30 s, 그 후에와 플랩을 위한 세척 microplate에 세척 완충기의 250 µL/well를 추가하기 위하여 펄럭입니다 따르십시오. 펄럭이기 후에 거품이 있는 경우에 (, 청결한 끝에 그(것)들을 잘랐습니다).
5. 100ul 효소 어원이 같은 말, 혼합을 판을 수동으로 동요해서 온화하게 추가하십시오 (판을 세척한 후에, 아)를 위해 그것을 한쪽으로 치우지 마십시오. 덮개 막을 가진 microplate를 밀봉하고, 암흑에 있는 20min를 위한 25 ℃에 알을 품으십시오. 단계 4.로 세척.
6. 채색: 각각으로 기질 A 해결책과 기질 B 해결책의 100ul 혼합물을 우물 (주 추가하십시오: 기질 A 해결책을 섞거든 1:1에 기질 B 해결책은 10min에 있는, 혼합물을 이용하고, 부당한 기질을 포함하거나 약동하고기 위하여, 피하기 위하여 금속을 이용하지 않습니다). 판을 수동으로 동요해서 온화하게 섞고으십시오, 덮개 막을 가진 microplate를 밀봉하고십시오 그 후에 15 분 동안 25 ℃에 채색을 위한 암흑에 알을 품으십시오.
7. 결심: 각각으로 정지 해결책의 50 µL를 잘 추가하십시오. 판을 수동으로 동요해서 온화하게 섞으십시오. 파란에서 황색에 때 기질 색깔 성공적으로 멈추십시오. 450/630 nm 이중 파장에 OD 가치를 5 분 안에 읽는 것을 추천하십시오.
결과 판단
결과를 재판하는 2개의 방법이 있습니다: 처음 것은 두번째 양이 많은 결심인 그러나, 거친 판단입니다. 표본의 OD 가치에는 Metronidazole 농도도의 부정 상호 관계가 있다는 것을 유의하십시오.
1. 품질 결심
Metronidazole의 농도 범위 (ng/mL)는 표준 솔루션의 그것과 표본의 평균 OD 가치 비교에서 얻어질 수 있습니다. , 표본 Ⅱ의 그것은 1.0이고, 표준 솔루션의 OD 가치를 표본 Ⅰ의 OD 가치가 0.3이다 추정하는 것은: 0개의 ppb를 위해 2.243는, 0.1 ppb를 위해 1.816, 0.3 ppb를 위해 1.415, 0.9 ppb를 위해 0.74, 2.7 ppb를 위해 0.313, 8.1 ppb를 위해 0.155, 그러므로 표본 Ⅰ의 농도 범위 2.7에서 8.1 ppb이고, 표본 Ⅱ의 그것은 0.9ppb에 0.1입니다.
2. 양이 많은 결심
흡수도 가치의 평균값은 첫번째 표준 솔루션 (0개의 기준)의 OD 가치 (B0)에 의해 분할되고 연속적으로 100%년까지, i.e 곱한 얻어집니다, 표본 및 표준 솔루션의 평균 OD 가치 (b)를 위해
흡수도 가치 = B ×100%의 백분율
B0
표본 표준 솔루션의 B-the 평균 OD 가치
B0-the는 0개의 ng/mL 표준 솔루션의 OD 가치를 평균합니다
Y-와 x-축으로 표준 솔루션의 흡수 백분율 및 Metronidazole 표준 솔루션 (ng/mL)의 semilogarithm 가치를 가진 표준 곡선을, 각각 당기십시오. 표준 곡선으로 그것의 흡수 백분율을 통합해서 표준 곡선에서 표본의 대응 농도를 해석하십시오. 유래 가치는 마지막으로 표본에 있는 Metronidazole 농도를 얻는 대응 희석 겹에 의해 연속적으로, 곱합니다.
직업적인 분석을 사용하여 이 장비의 소프트웨어는 다량의 표본의 정확하고 급속한 분석을 위해 더 편리할 것입니다. (이 소프트웨어를 위해 저희에게 연락하십시오).
경고
1. 25 ℃ 이하 실내 온도 또는 실내 온도에 (20-25 ℃) 돌려보내지지 않는 더 낮은 기준 OD 가치로 시약 및 표본의 온도는 이끌어 낼 것입니다.
2. 씻기 과정에 있는 microplate의 건고는 비선형 표준 곡선 및 바람직하지 않는 재현성을 포함하여 상황을 동반될 것입니다; 따라서 세척의 직후 다음 단계에 계속하십시오.
3. 균등하게 섞으십시오, 그렇지 않으면 바람직하지 않는 재현성이 있을 것입니다.
4. 정지 해결책은 2개 M 황산 해결책, 피부도 접촉하는 것을 피합니다입니다.
5. 그것의 만기일을 초과하는 장비를 이용하지 마십시오. 장비에서 묽게 했거나 썩음질을 한 시약의 사용은 감도 및 검출 OD 가치에 있는 변화로 이끌어 낼 것입니다. 사용하기 위하여 다른 제비의 장비에서 시약을 교환하지 마십시오.
6. 그것을 다시 봉하기 위하여 자동 바다표범 어업 부대로 사용되지 않는 microplate를 끼워넣으십시오. 이전 표준 솔루션 및 무색 색깔은 가볍습니다 - 과민한 및 이렇게 직접 빛에 드러낼 수 없습니다.
7. 이 해결책의 퇴보를 나타내는 어떤 색깔든지를 가진 채색 해결책을 버리십시오. 표준 솔루션 1 (0개의 ppb)의 검출 가치는의 0.5 이하 그것의 퇴보를 나타냅니다.
9. 저장과 만기일
저장: 얼지 않는 2-8 ℃에 상점.
만기일: 12 달; 생산의 날짜는 상자에 있습니다.
